D'une manière générale, en raison de la composition complexe du sang, de nombreuses substances, en particulier le plasma ou le sérum d'animaux supérieurs, ont un fort effet d'interférence sur la réaction entre le réactif TAL (LAL) et l'endotoxine. Par conséquent, lorsque nous testons l'endotoxine de tels échantillons, nous devons éliminer les substances interférentes avant le test.

À l'heure actuelle, les substances interférentes dans le plasma comprennent principalement divers inhibiteurs de protéase, des protéines de liaison aux endotoxines et des inhibiteurs du plasminogène. Pour la colorimétrie, le facteur Xa peut décomposer la chaîne peptidique Boc-LEU-Gly-Arg-PNA. Par conséquent, il est nécessaire d'éliminer ces substances interférentes avant la détermination.

Les méthodes de prétraitement pour éliminer les substances interférentes dans le sang sont les suivantes :

(1) Méthode de chauffage par dilution : le plasma est dilué 3 à 10 fois avec de l'eau dissoute, puis chauffé dans de l'eau à 37 ~ 100 ℃. Le temps de maintien est généralement de 5 à 10 minutes ;

(2) Méthode d'extraction au chloroforme : ajoutez la même quantité de chloroforme au plasma et faites vibrer pendant 3 heures, puis prenez la couche supérieure pour la détection ;

(3) Méthode de traitement à l'éther : ajoutez de l'éther au plasma pour le traitement et retirez l'éther à 40 ℃ ;

(4) Méthode à l'acide trifluoroacétique : ajouter de l'acide acétique dans un plasma pour ajuster le pH à 4,0, puis utiliser K2HPO4 pour ajuster le pH à 7 ~ 7,5 ;

(5) Méthode de traitement par tensioactif : comme la méthode de chauffage par dilution, seule l'eau de dilution est transformée en tensioactif ;

(6) Filtration sur gel ;

(7) Méthode de traitement alcaline : le plasma a été maintenu à 0,2 NNaOH à 37 ℃ pendant 10 minutes, puis neutralisé avec de l'HCl ;

(8) Méthode à l'acide perchlorique (PCA) ou nouvelle méthode à l'acide perchlorique (New PCA);

(9) Méthode des billes : mettez l'endotoxine absorbant la résine spéciale dans le plasma, sortez-la et ajoutez le réactif LAL pour la réaction.

Parmi ces méthodes, les méthodes couramment utilisées sont la méthode d'extraction au chloroforme, la méthode de chauffage par dilution, la méthode à l'acide perchlorique (PCA) et la nouvelle méthode à l'acide perchlorique (New PCA). Les deux premières méthodes doivent être discutées lors de la détermination en raison de l'existence d'un taux de récupération d'endotoxines, de faux positifs et d'autres problèmes. La méthode PCA (Nouvelle méthode PCA), en raison du bon taux de récupération de l'endotoxine ajoutée, est actuellement principalement utilisée en traitement préclinique au Japon.