Avant l'expérience, tous les réactifs et échantillons doivent être équilibrés à température ambiante ; après refusion, les échantillons doivent être à nouveau centrifugés et prélever le surnageant pour le test ; pour les réactifs ou la préparation des échantillons, mélanger et éviter la formation de mousse ; l'étalonnage et les échantillons sont recommandés pour les tests en double.

1. Ajouter ple : ajouter la solution de travail standard aux deux premiers puits à tour de rôle, et ajouter deux trous pour chaque concentration de solution de travail, 100 µ L de chaque puits. Les échantillons à tester sont ajoutés à d'autres puits, 100 µ L par puits (pour une concentration d'échantillon supérieure à la plage de test, échantillon dilué avec des dilutions standard et d'échantillon). La microplaque a été filmée et incubée à 37 ℃ pendant 90 minutes. Astuce : Lors de l'ajout de l'échantillon au fond de la microplaque, essayez de ne pas toucher la paroi du trou, secouez doucement et mélangez, pour éviter de générer des bulles. Le temps supplémentaire doit être contrôlé dans les 10 minutes.

2. Anticorps/antigène biotinylé : jeter le liquide et agiter pour sécher sans laver. 100 µ L de solution de travail d'anticorps/antigène biotinylé ont été immédiatement ajoutés à chaque puits, mélangés, microplaque plus pelliculés et incubés à 37 ℃ pendant 1 heure.

3. Lavage : secouer le liquide dans le trou, ajouter 350 µ L de liquide de lavage dans chaque puits, laisser tremper 1 à 2 minutes, aspirer ou secouer le liquide dans la microplaque et sécher sur le papier absorbant épais. Répétez cette étape de lavage de la plaque 3 fois. Astuce : La machine à laver peut être utilisée ici et dans d'autres étapes de lavage. Chaque étape de lavage est essentielle à l'expérience.

4. Conjugué enzymatique HRP : 100 μ L de solution de travail de conjugué enzymatique par puits, mélangée, recouverte d'un film et incubée à 37 ℃ pendant 30 minutes.

5. Lavage : jeter le liquide dans le puits et laver la plaque 5 fois de la même manière qu'à l'étape 3.

6. Substrat : ajoutez 90 μ L de solution de substrat (TMB) à chaque puits, mélangez bien, ajoutez un revêtement de film et incubez à 37 ℃ pendant environ 15 minutes. Remarque : Le temps d'incubation doit être raccourci ou prolongé en fonction de la situation réelle de développement de la couleur, mais pas plus de 30 minutes. Il peut être terminé lorsqu'un dégradé clair apparaît dans le trou standard.

7. Résiliation : Ajouter 50 μ L de solution de terminaison dans chaque puits pour terminer la réaction. Remarque : l'ordre d'ajout de la solution de terminaison doit être le même que celui de la solution de substrat.

8. Lire : Mesurer immédiatement la densité optique (DO) de chaque puits à 450 nm avec un lecteur de microplaques. Le lecteur de microplaques doit être ouvert à l'avance pour mettre en place la procédure de test.

9. Après l'expérience, remettez le réactif non utilisé au réfrigérateur selon la température de stockage spécifiée jusqu'à la durée de conservation.