La centrifugeuse de congélation de bureau à basse vitesse est utilisée en laboratoire pour la séparation primaire et l'extraction de macromolécules biologiques, de sédiments, etc. Sa tête pivotante est principalement en alliage d'aluminium, qui est de type plat et de type angle. Le tube centrifuge est composé de verre dur, de plastique dur polyéthylène et de tube en acier inoxydable. La centrifugeuse est équipée d'un moteur d'entraînement, d'une minuterie, d'un régulateur (indicateur de vitesse) et d'un système de réfrigération (la plage de température réglable est de - 20 ~ 40 ℃), qui peut remplacer les têtes rotatives avec différentes capacités et différents types de vitesses de rotation selon aux besoins du matériau centrifuge.

Étapes détaillées de la centrifugation pour l'extraction des protéines cytoplasmiques et nucléaires par une centrifugeuse de congélation de bureau à basse vitesse :

1. Déterminer l'état de croissance cellulaire. L'état de croissance cellulaire doit être de 80 % ou mieux :

2. Centrifugeuse à 1500r/min pendant 5min

3. Jetez le surnageant, lavez les cellules avec un volume égal de PBS froid et répétez 3 fois comme à l'étape 2

4. Selon la quantité de précipitation estimée, ajoutez 5 fois le volume de tampon isotonique dans les particules cellulaires pour que les cellules se suspendent doucement et évitent autant que possible la mousse.

5. Ajoutez du tampon de lyse dans les cellules en suspension et placez-le sur la glace pendant 15 minutes pour laisser les cellules se développer, ce qui peut être vérifié au microscope.

6. Pour les cellules expansées dans l'expérience cellulaire, ajoutez 10 % d'IGEPALCA-630 pour que la concentration finale atteigne 0,3 %, mélangez bien et ajoutez doucement

7. Centrifuger immédiatement (utiliser un tube EP de 1,5 ml à 5 500 r/min pendant 30 s pour les grandes quantités ; utiliser un tube de 50 ml à 5 500 r/min pendant 2 min pour les grandes quantités)

8. Transférer le surnageant (protéine cytoplasmique) dans un nouveau tube de congélation

9. Suspendez les cellules avec 5 fois le volume de particules en suspension dans un tampon isotonique et mélangez bien

10. Centrifuger la suspension cellulaire à 1500 tr/min pendant 5 min et retirer le surnageant

11. Suspendre les particules avec 2/3 fois le volume de tampon d'extraction

12. Placer le tube sur le mélangeur vibrant, agiter et mélanger à 700 tr/min pendant 15 min, puis à 1400 tr/min pendant 15 min. L'ensemble du processus doit être prudent pour éviter la mousse

13. Centrifuger à 9400 tr/min pendant 15 min, transférer le surnageant dans un nouveau tube à centrifuger congelé après centrifugation à basse température

14.Divisez en plusieurs parties et congelez-les avec de l'azote liquide et stockez-les (le stockage à long terme doit être à - 80 ℃, le stockage à court terme doit être à - 20 ℃)