En tant que matériau auxiliaire dans les expériences de détection ELISA, une enzyme plaque joue un rôle décisif et affecte directement les résultats expérimentaux finaux. La qualité de la Plaque enzymatique dépend principalement de sa sensibilité à l'adsorption des protéines, de la différence de capacité d'adsorption des protéines entre les plaques et les trous, et de la différence entre les lots de produits achetés plaque enzymatique . Par conséquent, la sélection d'un plaque enzymatique produit à haute sensibilité d'adsorption des protéines, la faible différence entre les trous de capacité d'adsorption des protéines et une faible différence entre les lots est la garantie pour l'expérimentateur d'obtenir des résultats expérimentaux fiables et stables.
Plaque enzymatique classification : selon différentes normes de classification, la plaque a différents classements.
1: Selon le nombre de trous, il peut être divisé en 96 trous, 48 trous, etc. Parce que le plaque enzymatique est principalement utilisé avec le lecteur de microplaques, le plaque mètre sur le marché est au plus de 96 trous, donc la microplaque est de 96 trous.
2 : Selon les différents fonds, il est divisé en fond plat, fond en U, fond en V, etc.
L'indice de réfraction de la base plate est faible, ce qui convient à la détection dans la microplaque ;
J L'indice de réfraction de la microplaque U est élevé, pratique pour l'échantillonnage, l'échantillonnage et le mélange, et peut observer directement le changement de couleur sans le placer sur la microplaque, afin de déterminer s'il existe une réaction immunitaire correspondante.
La microplaque de la base en V peut absorber avec précision l'échantillon.
3 : Selon les différentes capacités de liaison de la microplaque et de la protéine et d'autres molécules, elle est divisée en force de liaison élevée, force de liaison moyenne et amination.
(1) Force de liaison élevée
Après la surface de cette microplaque, sa capacité de liaison aux protéines est grandement améliorée, jusqu'à 300 ~ 400 ng IgG/cm2, et le poids moléculaire de la protéine liée principale est> 10 kD. L'utilisation de cette classe de microplaques peut améliorer la sensibilité et réduire relativement la concentration et la quantité de protéines enrobées, ce qui facilite la production de réactions non spécifiques. Après revêtement avec un antigène ou un anticorps, le détergent non ionique ne peut pas sceller efficacement le site de la protéine non liée, et la protéine doit être utilisée comme agent de scellement.
(2) Force de liaison moyenne
De telles plaques de microplaques se lient passivement à la protéine par des liaisons hydrophobes en surface, et conviennent comme supports en phase solide pour les protéines macromoléculaires de poids moléculaire > 20 kD, avec une capacité de liaison aux protéines de 200 à 300 ng IgG/cm2. En raison des caractéristiques de sa seule liaison aux macromolécules, il convient aux supports en phase solide comme anticorps ou antigènes non purifiés pour réduire le potentiel de réactivité croisée non spécifique. La plaque peut être une protéine inerte ou un détergent non ionique comme solution d'étanchéité.
(3) Amination
Cette microplaque après modification de surface possède un groupement aminé chargé positivement, dont la liaison hydrophobe est remplacée par une liaison hydrophile. Cette classe de microplaques convient comme support en phase solide pour les protéines à petites molécules. En utilisant un tampon et un pH appropriés, la surface se lie à de petites molécules chargées négativement via des liaisons ioniques. Du fait des propriétés hydrophiles de sa surface et de sa capacité à se lier de manière covalente avec d'autres réticulants, elle peut être utilisée pour fixer des molécules de protéines solubles dans des agents de décontamination tels que Triton-100, Tween 20, etc. Le défaut de cette plaque est en raison de l'hydrophobicité réduite ; de plus, la surface doit être efficacement fermée. En raison des propriétés de surface hydrophiles et covalentes, la solution de scellement utilisée doit être capable d'interagir avec n'importe quel groupe fonctionnel dans le groupe amino non réactif et l'agent de réticulation sélectionné.
4. Selon la couleur peut être divisé en transparent, noir et blanc.
Le transparent est le plus couramment utilisé pour les expériences d'immunisation enzymatique les plus générales. En contraste avec la microplaque transparente, il existe également des microplaques opaques pour la détection lumineuse, généralement en noir et blanc. La microplaque noire elle-même a une absorption de lumière, donc son signal est beaucoup plus faible que la microplaque blanche, elle est donc généralement utilisée pour détecter une lumière forte, telle que la détection de fluorescence. La microplaque blanche est utilisée pour la détection de lumière faible, souvent utilisée pour la chimiluminescence générale. De plus, la microplaque noire peut également affaiblir le problème des réactions non spécifiques. Dans le même temps, il est important de noter qu'avec la microplaque générale, il ne peut pas y avoir de détection lumineuse, car la lumière émise par la réaction de chimioluminescence est isotrope, si, avec une microplaque transparente, la lumière ne se propagera pas seulement à partir de la direction verticale, mais aussi de la direction horizontale, éclairez facilement à travers l'espace entre le trou et la paroi du trou, ce qui fait que la lumière de la valeur d'absorption de la lumière du trou est affectée par la lumière émise par le trou adjacent.
Une bonne microplaque doit avoir de bonnes performances d'adsorption, une faible valeur à blanc, une transparence élevée du fond du trou et des performances similaires entre les plaques et entre les trous d'une même plaque. En raison de la différence de matières premières et de la différence de processus de production, la qualité des différents produits est très différente. Par conséquent, les performances de chaque lot de microplaques doivent être vérifiées à l'avance avant utilisation. Les méthodes d'inspection couramment utilisées sont une certaine concentration d'IgG humaines (généralement 10 ng/ml) recouvertes de puits de plaque ELISA, après lavage, l'ajout d'une dilution appropriée d'anticorps IgG anti-humain marqué par une enzyme dans chaque puits, le lavage après conservation à la chaleur, ajouter la couleur du substrat, arrêter la réaction enzymatique et mesurer l'absorbance de la solution dans chaque puits respectivement. Les conditions de réaction ont été contrôlées de manière à ce que la lecture de chaque puits soit maintenue à une absorbance d'environ 0,8. La moyenne des lectures totales a été calculée. La différence entre la moyenne de toutes les lectures individuelles et toutes les lectures doit être inférieure à 10 %. Les trois microplaques suivantes sont A, B et C à titre d'exemple.
Méthode directe : pour détecter l'adsorption des IgG humaines à la surface de la microplaque
Méthode sandwich à double anticorps : antigène dans le sérum positif pour l'anticorps anti-humain
Comme on peut le voir sur la figure ci-dessus, dans ces trois types de plaques bio-enzymatiques, la microplaque de classe A a un meilleur effet d'adsorption des protéines, mais améliore également la sensibilité de l'adsorption des protéines, ce qui peut fournir des données expérimentales plus fiables. De plus, vous pouvez vous renseigner sur la plaque de la différence de lot. Ce qui suit est la différence de lot d'une certaine plaque. Comme le montre le tableau de données de différence intra-lot, la microplaque a une bonne stabilité inter-lots et la différence de coefficient de variation (CV) intra-lot est d'environ 5,0 %, ce qui est nettement inférieur au coefficient de variation intra-lot inférieur à 10,0 % dans la norme de contrôle de qualité pour la réaction immunitaire clinique. Par conséquent, il convient également aux expériences ELISA.