R la récupération
1. Retirez le tube congelé de l'azote liquide et immédiatement dans un bain-marie à 37℃, en secouant légèrement. Une fois le liquide fondu (environ 1 à 1,5 minute), sortez de l'alcool et placez-le sur la table de travail ultra-propre.
2. Prenez la suspension cellulaire dans un tube à centrifuger de 15 ml avec 10 ml de milieu (lavez le tube congelé avec le milieu et lavez toutes les cellules collées au mur) et centrifugez à 1000 pendant 5 minutes.
3. Le surnageant a été inversé et 1 ml du milieu a été ajouté pour mettre les cellules en suspension. Fumer dans un plat de 10 cm avec 10 ml de milieu et agiter doucement à gauche et à droite pour répartir uniformément les cellules dans le plat.
4. Marquez le type de cellule et la date, le nom humain, etc., mettez-le dans l'incubateur à CO2, collez les cellules et changez le milieu.
5. Le milieu a été changé une fois tous les 3 jours.
P massage
1. Les plantes ont été repiquées pour atteindre une couverture de 80 à 90 %.
2. Sur le support d'origine .
3. Ajouter la trypsine appropriée (couvrir juste les cellules) et digérer pendant 1-2 minutes .
4. La digestion a été terminée en ajoutant un volume égal du milieu contenant du sérum .
5. Soufflez les cellules avec un pistolet à pipette et laissez-les toutes en suspension.
6. Les cellules ont été aspirées dans un tube à centrifuger de 15 ml et centrifugées à 1000 pendant 5 min.
7. Verser le surnageant et ajouter 1-2 ml de milieu pour faire exploser toutes les cellules.
8. Les cellules ont été passées dans plusieurs boîtes de culture en fonction de l'espèce cellulaire. Généralement, les cellules cancéreuses sont divisées en 5 cellules et trois cellules normales sont transmises. Continuez à cultiver.
Libre de digérer les cellules et de les centrifuger (ibid. ci-dessus).
Suspendez les cellules avec la solution de stockage congelée assortie, divisez-les dans un tube de congélation stérilisé, reposez-vous pendant quelques minutes et spécifiez le type de cellule et la date de stockage congelé.4℃ 30min, -20℃ 30min, -80℃ pendant la nuit, et puis stocké dans une perfusion d'azote liquide.
Préparation de la solution de cryoconservation : 70 % milieu 20 % FBS 10 % DMSO. Le DMSO doit être ajouté lentement et secoué régulièrement.